早在20世紀初，植物學(xué)家Mikhail Tsvet為了分離植物中天然色素，設(shè)計了早的色譜實驗：碳酸鈣被置于玻璃管中，石油醚被選作流動相，不同的色素按疏水性由強至弱的順序被洗脫。經(jīng)過數(shù)十年的發(fā)展，5um~10um大小的球形硅膠顆粒，也就是現(xiàn)在被廣泛應(yīng)用于HPLC系統(tǒng)的商品化色譜柱才開始大規(guī)模生產(chǎn)。與Tsvet實驗類似的色譜模式，被稱為正相色譜（normal phase chromatography）。相對應(yīng)的，組分的洗脫順序相反，疏水性強的化合物更晚被洗脫的情況，則被稱為反相色譜（reversed-phase chromatography）。反相色譜已經(jīng)成為了現(xiàn)今應(yīng)用廣泛的色譜模式。為了在反相色譜體系中達到理想的分離效果，我們對固定相、流動相、溫度等等參數(shù)一一進行優(yōu)化。接下來我們將討論一個簡單情況：各組分按疏水性差異被依次洗脫。

        今天的主角：C18。C18現(xiàn)今的“江湖地位”可以說是天時、地利、人和三者相互結(jié)合的結(jié)果： 

   C18分子本身與樣品組分，進行簡單的疏水相互作用，不受二級作用（例如，氫鍵）的干擾。當目標組分被流動相帶入硅膠孔隙中，依據(jù)疏水性的差異，不同組分在固定相上“停留”的時間也不同。

   C18與硅膠也堪稱天作之合。通常情況下，硅膠基質(zhì)色譜填料，通過硅烷化試劑與硅膠表面的硅羥基進行縮合反應(yīng)，以達成化學(xué)鍵合。而各類單功能團硅烷之中，十八烷基二甲基氯硅烷的鍵合反應(yīng)相對更容易控制。C18在自然狀態(tài)下非常穩(wěn)定，小于18個碳原子的直鏈烷烴在物理性質(zhì)上傾向于液體，不易控制。

      C18提供的疏水選擇性“剛剛好”。既不會由于C鏈過長導(dǎo)致容易吸附樣品（主要還是針對小分子來說，大分子仍舊容易在C18吸附），也不會因為疏水性不足而導(dǎo)致無法分離各組分。

     由此可見，在使用C18色譜柱時，組分在流動相中的狀態(tài)應(yīng)當成為我們時刻關(guān)注的一個重要點。